基本信息：

細胞概述

- 定義：小鼠原代腎足突細胞是從小鼠組織中分離得到的，未經(jīng)傳代培養(yǎng)或僅經(jīng)過少數(shù)幾次傳代的細胞，保持了細胞在體內(nèi)的原始特性。
- 來源：主要來自小鼠的腎組織，通常選取2-3月齡、體重18-22g的BALB/c小鼠等合適品系的小鼠作為細胞供體。
- 重要性：足細胞連同腎小球基底膜和皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障，對于維持機體正常的功能和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定至關(guān)重要。

細胞特性

- 形態(tài)特征：呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，又稱足突，呈指狀交叉覆蓋于腎小球基底膜外表面。
- 生長特性：屬于貼壁生長的細胞，需要附著在合適的基質(zhì)表面才能生長和增殖。
- 功能特性：正常情況下可分泌腎小球基底膜的主要組成成分，如IV型膠原和纖維連接蛋白；在促腎纖維化等刺激下，能分泌具有降解腎小球基底膜作用的基質(zhì)金屬蛋白酶和組織蛋白酶，參與腎小球基底膜的代謝平衡。

分離與培養(yǎng)

- 分離方法：常用機械研磨過不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法，或單純酶解法。先將小鼠處死，取出，剪取腎皮質(zhì)部，經(jīng)研磨、過濾、消化等步驟，獲得腎小球，再進一步處理得到腎足突細胞。
- 培養(yǎng)條件：一般使用F-12等培養(yǎng)基，添加5%馬血清、2.5%胎牛血清、胰島素、氫化可的松、轉(zhuǎn)鐵蛋白等成分，在37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

鑒定方法

- 形態(tài)學(xué)觀察：通過光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，如星型多突狀、足突的指狀交叉等。
- 免疫學(xué)鑒定：采用免疫熒光或免疫組化方法，檢測細胞特異性標(biāo)記物，如Podocin、WT-1等，若呈陽性則表明為腎足突細胞。

產(chǎn)品名稱 小鼠腎足突細胞
組織來源 腎組織
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
方法簡介 公司實驗室分離的小鼠腎足突采用機械研磨過不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測 公司實驗室分離的小鼠腎足突經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

該細胞只可用于科研。出現(xiàn)以下情況不予以重發(fā)：客戶造成細胞污染；客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好；細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片；細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理；細胞收到2天內(nèi)，未告知相關(guān)情況。
公司出售的產(chǎn)品：

傳代步驟：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 - 2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6 - 8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
復(fù)蘇步驟：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養(yǎng)基后吹勻。換液并檢查細胞密度。
凍存步驟：
以T25瓶為例：
細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
1000RPM離心5分鐘去掉上清，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存，記錄凍存管位置以便下次拿取。