規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：DH5α 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格 ：100ul*20、100ul*100
分類：克隆感受態(tài)細(xì)胞
用途：生化試劑（用于科研試驗(yàn)研究）
儲(chǔ)存條件: -70℃保存，必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:（性狀） 干冰運(yùn)輸，單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽性對照）能長出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個(gè)菌都沒長出來，重復(fù)了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān)，還是連接出了問題？哪個(gè)可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對照，確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲(chǔ)存過程中沒有發(fā)生凍融的情況，是可以用來轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時(shí)間過長，轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。
操作方法：
1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

甲胎蛋白單克隆抗體（包被） AFP(A2) 0.1ml
甲胎蛋白單克隆抗體(檢測) AFP(A4) 0.1ml
ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1抗體 ARFIP1 0.1ml
芳香烴受體抗體 AHR 0.1ml
吸引素抗體 ATRN 0.2ml
腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體 ABCA1 0.1ml
蛋白激酶B2 AKT2 0.1ml
生成素2抗體 Angiopoietin 2 0.1ml
芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體 Aromatase 0.1ml
腺苷A2A受體抗體 Adenosine Receptor A2a 0.1ml
蛋白激酶A錨定蛋白95抗體 AKAP95 0.1ml
頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 ASBT 0.1ml
去整合素樣金屬蛋白酶8抗體 ADAM8 0.2ml
芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白3抗體 AADACL3 0.2ml
ACN9蛋白抗體 ACN9 0.2ml
雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端） ADAR1 (N-terminus) 0.2ml
腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體 AMPK alpha 2 0.1ml
腺苷酸激酶抗體 ADK 0.1ml
α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1 A2ML1 0.1ml
細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白3抗體 3-Apr 0.1ml
肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體 Actin 0.1ml
ATP結(jié)合蛋白家族7抗體 ABCB7 0.2ml
ASCL2蛋白抗體 ASCL2 0.2ml
磷酸化脊髓蛋白1抗體 phospho-Ataxin 1(Ser775) 0.1ml
磷酸化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體 phospho-ATF1 (Ser63) 0.1ml
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 phospho-ATF2 (Ser480) 0.1ml
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 phospho-ATF2 (Thr51 + Thr53) 0.1ml
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51) 0.1ml