基本信息：

人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞椎間盤(pán)中央髓核的軟骨樣細(xì)胞，分泌蛋白聚糖維持基質(zhì)高含水量，隨年齡增長(zhǎng)細(xì)胞外基質(zhì)降解致椎間盤(pán)退變，其干性特征可用于組織工程修復(fù)研究。

產(chǎn)品名稱(chēng) 人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞
組織來(lái)源 椎間盤(pán)組織
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
方法簡(jiǎn)介 公司實(shí)驗(yàn)室分離的人椎間盤(pán)髓核采用膠原酶-中性dan白酶混合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè) 公司實(shí)驗(yàn)室分離的人椎間盤(pán)髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息 
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

該細(xì)胞只可用于科研。出現(xiàn)以下情況不予以重發(fā)：客戶(hù)造成細(xì)胞污染；客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好；細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片；細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理；細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知相關(guān)情況。
公司出售的產(chǎn)品：

傳代步驟：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 - 2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6 - 8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1 - 2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
復(fù)蘇步驟：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1 - 2mL培養(yǎng)基后吹勻。換液并檢查細(xì)胞密度。
凍存步驟：
以T25瓶為例：
細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
1000RPM離心5分鐘去掉上清，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存，記錄凍存管位置以便下次拿取。