PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

cis-Octahydro-isoindole  中文名：  分子式：C8H15N  度：98.0%  小鼠16α羥基雌1(16-αOHE-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

2-Benzylsuccinic acid  中文名：  分子式：C11H12O4  度：98.0%  小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid  中文名：  分子式：C17H23NO5  度：98.0%  小鼠11β羥基類固醇脫氫酶(11β-HSD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Atorvastatin calcium  中文名：阿托伐他汀鈣  分子式：C33H35FN2O5  度：98.0%  小鼠1,4,5-三0酸肌醇（IP3）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(2R,3S)-3-Phenylisoserine ethyl ester  中文名：  分子式：C11H15NO3  度：98.0%  小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
小鼠β甘露糖苷酶elisa試劑盒   小鼠β甘露糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠β甘露糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（分裝），產(chǎn)品別名：小鼠β甘露糖苷酶試劑盒、小鼠β甘露糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Ketoprofen  22071-15-4  中文名：酮基布洛芬  分子式：C16H14O3 

小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bisoprolol fumarate  中文名：富馬酸比索洛爾  分子式：C22H35NO8  度：98.0%

小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Bis(4-hydroxy-3,5-dimethylphenyl) sulfone  中文名：雙(4-羥基-3,5-二甲苯基)砜  分子式：C16H18O4S  度：98.0%

小鼠β酚(β-Nph)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole  中文名：  分子式：C16H21N3O4S 

小鼠β酚(β-naphthol)LISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Bisphenol P  中文名：雙酚P  分子式：C24H26O2
病毒PCR檢測試劑盒說明書HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-丙氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：0.98D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride

人臍動脈平滑肌細(xì)胞cDNAHUASMC cDNAD-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：0.99D-Alanine tert-Butyl Ester Hydrochloride

V79細(xì)胞，中國倉鼠肺細(xì)胞 人亞歷山大細(xì)胞系,PLC/PRF/5細(xì)胞 膀胱上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-精氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.98D-Arginine

猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞;ELS1D-核糖-5-1酸二鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：>85%,D-Ribose 5-phosphate di salt hydrate

VCAM1 Others Human 人 CD106 / VCAM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 蘇木色精，蘇木素質(zhì)量規(guī)格：進分Hematoxylin
恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2亞甲基二水楊酸(異構(gòu)體的混合物)(>90.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(T)Methylenedisalicylic Acid (mixture of isomers)

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化);PC-12(低分化) 細(xì)胞，BEL-7402細(xì)胞 D3細(xì)胞，129小鼠ES細(xì)胞2-氨基-2',5-二氯二苯甲酮(>98.0%(N))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)2-Amino-2',5-dichlorobenzophenone

MiaPaCa-2, 人細(xì)胞 Human4-1丙氧基-2-羥基二苯甲酮(>97.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)(T)4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone

CST4 Others Human 人 CST4 / Cystatin-4 / Cystatin-S 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3,3',4,4'-二苯酮四羧酸二酐(>96.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(T)3,3',4,4'-Benzophenonetetracarboxylic Dianhydride

人無色素睫狀上皮細(xì)胞 cDNAHNPCEpiC cDNA10-去乙酰巴卡丁III質(zhì)量規(guī)格：10-Deacetylbaccatin-III
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。