PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：天花病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

BMP-7   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 ADI  Anthraquinone-1,5-disulfonic acid di salt  中文名：蒽醌-1,5-二磺酸二鈉鹽  分子式：C14H6Na2O8S2  度：98.0%

BloodRNAKit   100T                 Periplocogenin  112899-63-5  中文名：  分子式：C28H42O6 

BloodDNAMaxiKit   10T  Periplocogenin  中文名：  分子式：C28H42O6 

BEZ235(NVP-BEZ235)   100mg                 Pilosol A  501086-15-3  中文名：  分子式：C13H12O 

BEZ235 (NVP-BEZ235)   50mg  Pilosol A  501086-15-3  中文名：  分子式：C13H12O  度：%  關(guān)鍵詞：
小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Azithromycin dihydrate  117772-70-0  中文名：阿奇霉素二水物  分子式：C38H72N2O12  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Ezetimibe  中文名：依澤替米貝  分子式：C24H21F2NO3 

小鼠11β羥基類固醇脫氫酶(11β-HSD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Azithromycin dihydrate  117772-70-0  中文名：阿奇霉素二水物  分子式：C38H72N2O12 

小鼠1,4,5-三0酸肌醇（IP3）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Azilsartan  中文名：阿齊沙坦  分子式：C25H20N4O5  度：98.0%

小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Azilsartan  中文名：阿齊沙坦  分子式：C25H20N4O5
天花病毒PCR檢測試劑盒說明書HL-60人原髓細(xì)胞細(xì)胞 HL-60 primary human myeloid leukemia cells IMDM(GIBCO)+20%FBS西多福韋質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Cidofovir

IGFBP4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP4 蛋白 (His 標(biāo)簽)4-氨基-5-咪唑甲酰胺質(zhì)量規(guī)格：>98%(滴定)5-Amino-4-imidazolecarboxamide

GH3(大鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠背脊髓神經(jīng)元MN-dscTNP 470/O-(氯乙酰氨甲?；?/span>)煙曲霉素醇 質(zhì)量規(guī)格：≥97%AGM-1470

小腸內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)牛磺石膽酸鈉(進分)質(zhì)量規(guī)格：≥97%進口分裝 taurolithocholate

SGK3 Others Human 人 SGK3 / SGKL 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 代森鋅質(zhì)量規(guī)格：>90%Zineb
IFNW1 Others Human 人 Ierferon omega-1 / IFNω / IFNW1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽乳糖蔗糖瓊脂shēng huà shì jì容量：25克

犬腎細(xì)胞系/野生型;MDCK/wild別嘌醇相關(guān)物質(zhì)A cllopurinol Rqlctqd CoMpound c;3-cMino-4-ccrboxcMidopyrczolq HqMisulfctq 7211-79-1

SEMA5A Others Mouse 小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 半胱安;巰安;2-安;流代醇安;2-安基流醇 CystqcMinq;Dqccrboxycystqinq;2-cMinoqthcnqthiol;2-cMinoqthylMqrccptcn;β-MqrccptoqthylcMinq;ThioqthcnolcMinq;MqrccMinq; Mqc 1960/3/1

人成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL酸性2，英文名或英文縮寫：Nigrosine water soluble，級別：高，99%，規(guī)格：10支/盒

C918細(xì)胞，人眼脈絡(luò)色素瘤細(xì)胞 糞腸球菌(高耐) 正常小鼠Sertoli細(xì)胞;TM43244-41-5四本硼鉀potewwium TETRApxenYLBORATE 97
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。