PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：嗜熱鏈球菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Adefovir dipivoxil  142340-99-6  中文名：阿德福韋酯  分子式：C20H32N5O8P  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗內(nèi)膜抗體elisa試劑盒   小鼠抗內(nèi)膜抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠抗內(nèi)膜抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗內(nèi)膜抗體試劑盒、小鼠抗內(nèi)膜抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

Adefovir  106941-25-7  中文名：阿德福韋  分子式：C8H12N5O4P  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

Acyclovir  59277-89-3  中文名：阿昔洛韋  分子式：5O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

Acid Black 1  1064-48-8  中文名：酸性黑 1  分子式：C22H14N6Na2O9S2  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Acetylatractylodinol  61582-39-6  中文名：乙酰蒼術(shù)素醇  分子式：C15H12O3  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  抗菌; ; 蒼術(shù); 聚乙炔; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
兔子睪elisa試劑盒   兔子睪試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子睪試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子睪試劑盒、兔子睪elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  8-Azaguanine  134-58-7  中文名：8-氮雜鳥嘌呤  分子式：C4H4N6O 

兔子睪elisa試劑盒   兔子睪試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子睪試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子睪試劑盒、兔子睪elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  8-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  119-28-8  中文名：8-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S 

兔子睪(T)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           7-Amino-4-methylcoumarin  中文名：7-氨基-4-甲基香豆素  分子式：C10H9NO2 

兔子睪(T)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  7-Chloro-1,2,3,4-tetrahydrobenzo[b]azepin-5-one  中文名：  分子式：C10H10ClNO  度：98.0%

兔子高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              7-Benzyloxyindole  中文名：7-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO
嗜熱鏈球菌PCR檢測試劑盒說明書LY9 Others Mouse 小鼠 Ly9 / CD229 / SLAMF3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 對葉百部堿（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Tuberstemonine

小鼠T細(xì)胞瘤細(xì)胞;Cyc-Tag(S49)莪術(shù)醇(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Curcumol

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 莪術(shù)二酮（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Curdione

U251人細(xì)胞 Human glioma cell line U251 DMEM+10% FBS蒽醌(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Anthraquinone

U251細(xì)胞，人神經(jīng)細(xì)胞 滑假絲酵母 人海馬趾神經(jīng)元RNAHN-h miRNA5 μg對稱N,N-二甲基精氨酸質(zhì)量規(guī)格：>95%(2S)-2-amino-5-[(N,N'-dimethylcarbamimidoyl)amino]pentanoic acid
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 基磺酸shēng huà shì jì容量：100毫克

CM-H098人真皮微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL錄磺酰異青醋酯 Chlorosulfonyl isocycnctq 1189-71-2

BGC-803細(xì)胞，人細(xì)胞 人細(xì)胞,HOS細(xì)胞 人臍內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC鹽酸胍 (分子生物級) Guanidine hydrochloride (for molecular... 1950-1-1 100G 通用試劑

EL4(小鼠瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2N-三(羥甲基)甲基-2-基乙磺酸鈉鹽shēng huà shì jì容量：保存：-20℃50/300ul/支

BSG Others Human 人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) DTE 1g/5g/25g原裝 Amresco 0425
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。