PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：塔那痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Amitriptyline   中文名：鹽酸阿米替林  分子式：C20H24ClN    （NO）測(cè)定試劑盒（還原酶法）

Amitraz  中文名：雙甲瞇  分子式：C19H23N3    ATP酶測(cè)試盒（測(cè)普通組織勻漿的Na+K+、Ca2+Mg2+－ATP酶，樣本前處理不需高速離心）                 

Amisulpride  中文名：阿米舒必利  分子式：C17H27N3O4S    總脂酶檢測(cè)   Liver / muscle glycogen detection

Amiodarone   中文名：鹽酸胺酮  分子式：C25H30ClI2NO3    肝脂酶/脂蛋白脂酶檢測(cè)   Lipofuscin (excluding colorimeic detection)

Aminophylline  中文名：氨茶堿  分子式：C16H24N10O4    肝/肌糖元檢測(cè)   Lipofuscin (including colorimeic detection)
兔子皮質(zhì)/上腺(CO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              9-Hydroxy-4-androstene-3,17-dione  中文名：9-羥基-4-雄甾烯-3,17-二酮  分子式：C19H26O3 

兔子凝血因子Ⅱelisa試劑盒   兔子凝血因子Ⅱ試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子凝血因子Ⅱ試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子凝血因子Ⅱ試劑盒、兔子凝血因子Ⅱ elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  9,16-Dioxo-10,12,14-octadecatrienoic acid  中文名：  分子式：C18H26O4  度：%

兔子凝血因子Ⅱelisa試劑盒   兔子凝血因子Ⅱ試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子凝血因子Ⅱ試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子凝血因子Ⅱ試劑盒、兔子凝血因子Ⅱ elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  9,10-Bis(3,5-dihydroxyphenyl)anthracene  中文名：9,10-雙(3,5-二羥苯基)蒽  分子式：C26H18O4  度：98.0%

兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  9,9-Bis(4-amino-3-methylphenyl)fluorene  中文名：9,9-雙(4-氨基-3-甲苯基)芴  分子式：C27H24N2  度：98.0%

兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  9,9-Bis(4-amino-3-methylphenyl)fluorene  107934-60-1  中文名：9,9-雙(4-氨基-3-甲苯基)芴  分子式：C27H24N2  度：98.0%
塔那痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)JAR細(xì)胞，胚絨毛癌細(xì)胞 人,LTPEP-a-2細(xì)胞 KM3, 人細(xì)胞2'-甲氧基腺;2'-O-甲基腺苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR2'-O-Methyladenosine

貓腎細(xì)胞;F81D-纈氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRD-Valine

TNFSF9 Others Mouse 小鼠 4-1BBL / TNFSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2'-脫氧鳥苷-3'-單1酸二鈉質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR2'-Deoxy-3'-guanylic acid di salt

CL-0395NCI-H2227(人小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2N-乙酰-DL-甲硫氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.99N-Acetyl-DL-mine

CADM3 Others Rat 大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) DL-高半胱氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.95DL-Homocysteine
Hep G2(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×23A-氨基-3A-脫氧-(2AS,3AS)-α-環(huán)糊精水合物(>90.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(HPLC)3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-α-cyclodextrin Hydrate

ACY1 Others Mouse 小鼠 ACY1 / Aminoacylase-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3A-氨基-3A-脫氧-(2AS,3AS)-γ-環(huán)糊精水合物(>95.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-γ-cyclodextrin Hydrate

人成纖維細(xì)胞總RNAHCF NA6-O-α-D-麥芽糖基-β-環(huán)糊精(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)6-O-α-D-Maltosyl-β-cyclodextrin

CROT Others Human 人 CROT (474 Leu/Val) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 三甲基-β-環(huán)糊精(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)Trimethyl-β-cyclodextrin

敘利亞倉鼠肌肉細(xì)胞;GH-M13,5-雙[3,5-雙(芐氧基)芐氧基]芐溴(>97.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)3,5-Bis[3,5-bis(benzyloxy)benzyloxy]benzyl Bromide
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。