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    10×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液注意事項

    發(fā)表時間:2022-11-03
    10×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液注意事項:
    1) 由于細胞凋亡是一個快速的過程,建議樣品在染色后1小時之內(nèi)進行分析。
    2) 對于貼壁細胞,消化是一個關(guān)鍵步驟。貼壁細胞誘導(dǎo)細胞凋亡時如有漂浮細胞,需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。*消化時間過短,細胞需要用力吹打才能脫落,容易造成細胞膜的損傷,PI攝入過多;消化時間過長,細胞膜同樣易造成損傷,甚至?xí)?br /> 影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合。消化時將*鋪滿孔板底后,輕搖時*與細胞充分接觸,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段時間,待細胞間空隙增大,瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。
    3) 實驗中如需要固定細胞,比如在檢測凋亡的同時檢測細胞周期,只能選用Annexin V-FITC,而不能選用Annexin V-EGFP,因為在固定過程中EGFP會變性導(dǎo)致喪失激發(fā)熒光的能力。固定需要先將細胞與Annexin V-FITC進行孵育,并用binding buffer洗掉未結(jié)合的Annexin V-FITC。因為固定過程中細胞通透性增加會產(chǎn)生細胞碎片,可以和Annexin V結(jié)合,對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
    4) 如果樣品來源于血液,請務(wù)必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS,能與Annexin V結(jié)合,從而干擾實驗結(jié)果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
    5) 試劑在開蓋請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。

    6) Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。

    紅細胞陰離子交換蛋白1抗體
    腦特定蛋白Brn3B抗體
    Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
    骨形態(tài)發(fā)生蛋白4抗體
    腦和急性白血病胞漿蛋白抗體
    骨髓基質(zhì)干細胞抗原2抗體
    組蛋白相關(guān)Bmi1抗體
    乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體
    大腦富含鳥苷酸激酶相關(guān)蛋白抗體
    腦富含膜附著信號蛋白1抗體
    卵黃狀黃斑病蛋白3抗體
    卵黃狀黃斑病蛋白抗體
    卵黃狀黃斑病蛋白4抗體
    炭疽桿菌菌體蛋白抗體
    EBV立即早期基因BRLF1抗體
    腦表達X連鎖蛋白4抗體
    B淋巴細胞新型蛋白1抗體
    核突觸蛋白β抗體
    BTRC2蛋白抗體
    BEND3蛋白抗體
    BEND4蛋白抗體
    BEND6蛋白抗體
    胎兒阿茲海默病抗原/核小體重塑因子抗體
    巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白2抗體
    巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白5抗體
    巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白4抗體


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