磷酸化轉(zhuǎn)錄因子SOX9蛋白抗體的生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對(duì) 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì)有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來篩選最適條件；
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活；
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生物素化會(huì)降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性；
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合；
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會(huì)對(duì)生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用；
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對(duì)某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
AGPHD1 氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
ASGPR1 唾液酸糖蛋白受體1抗體
ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗體
AKAP5 A激酶錨定蛋白5抗體
ATXN3L 小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體
ASTE1 ASTE1蛋白抗體
phospho-APG4B(Ser309) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體
AFAP 微絲相關(guān)蛋白1抗體
ADORA1 腺苷A1A受體抗體
ARSB 芳基硫酸酯酶B抗體
ABAT γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
A2BP1 共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體
ADAM17 腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶
ARNT2 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體
ABH8 AlkB同源蛋白8抗體
ABI3BP ABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體
ARHGAP20 Rho GTP酶激活蛋白20抗體
ASB10 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族10抗體
ALDH1L1 乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體
Axin 2 軸抑制蛋白2抗體
ANGPTL6 血管生成素相關(guān)蛋白6抗體
AMH Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體
EphA8 酪氨酸蛋白激酶受體A8抗體
Acetoacetyl-CoA synthetase 脂肪酰輔酶A家族成員1抗體
ARNTL2 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體
phospho-AANAT (Thr29) 磷酸化芳香胺N-乙酰化轉(zhuǎn)移酶抗體
ABLIM1 肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體
AMIGO2 粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體
