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    亞洲柑桔黃龍病菌PCR試劑盒反應(yīng)五要素

    發(fā)表時間:2021-12-10
    亞洲柑桔黃龍病菌PCR試劑盒反應(yīng)五要素:

    參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

    引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

    ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

    ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

    ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

    ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

    ⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

    ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

    ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

    引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

     巨大芽孢桿菌
     腐敗希瓦氏菌
     開菲爾乳桿菌
     渾濁紅球菌
     香茅醇假單胞菌
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     紅平紅球菌
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     解藻弧菌(溶藻弧菌)
     洋蔥伯克霍爾德氏菌
     霍亂弧菌
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     施氏假單胞菌
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     壞死梭桿菌壞死亞種
     泛養(yǎng)副球菌
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     乳酸片球菌
     戊糖片球菌
     朝鮮芽孢八疊球菌
     宋氏志賀氏菌
     木醋桿菌
     明亮發(fā)光桿菌
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     嗜酸乳桿菌
     干酪乳桿菌
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     德氏乳桿菌乳酸亞種(萊氏曼氏乳桿菌)
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     側(cè)孢短芽孢桿菌
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     牙齦卟啉單胞菌


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