上皮細(xì)胞膜蛋白2抗體的生物素化標(biāo)記實驗要點

上皮細(xì)胞膜蛋白2抗體的生物素化標(biāo)記實驗要點：
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件；
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活；
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性；
6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合；
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用；

8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。

抗體制備過程：
1.材料與試劑
a．提取的動物 Ig
b．弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑
c．青霉素和鏈霉素
d．實驗動物 兔
e．其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進(jìn)行動物免疫實驗。
4、試取血樣進(jìn)行測試，查看免疫效果。
5、如果免疫成功，殺死實驗活體，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清（無菌采制）
酰基輔酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體
α/β水解酶4抗體
ADCK2蛋白抗體
乙醛脫氫酶16家庭A1抗體
粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體
乙醇脫氫酶1抗體
δ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體
肌萎縮側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體
α2巨球蛋白(α-2M)抗體
ACCSL蛋白抗體
甲胎蛋白抗體
β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體
星形肌動蛋白抗體
系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體
磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體
磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體
接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體
磷酸化接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體
膜粘連蛋白7抗體
3號染色體開放閱讀框15抗體
載脂蛋白B受體抗體
三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白2抗體
載脂蛋白B抗體
花生四烯酸15脂氧合酶2抗體
載脂蛋白C4抗體
低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體